Denhardt's - Lösung (50X)HS-Nr.: 38220000Lagerung: -20°C (Versand: Nasseis), LGK: 10-13Zusammensetzung:Albumin Fraktion V.....0,1 g/10 mlFicoll® 400.....0,1 g/10 mlPolyvinylpyrrolidon K30.....0,1 g/10 mlHinweis:Denhardt's Lösung wird zum Blockieren von Oberflächen zur Verhinderung der unspezifischen Bindung von Nukleinsäuren zum Beispiel an Nitrocellulose- oder Nylon- Membranen in Hybridisierungsexperimenten verwendet. Denaturierte DNA bindet an Nitrocellulose-Membranen, nicht jedoch freie RNA. Durch Vorbehandlung des Filters mit Denhardt's Lösung wird unspezifisches Binden der denaturierten oder einzelsträngigen DNA an die Membranen verhindert. Das spezifische 'annealing' der denaturierten DNA an die komplementären DNA wird nicht behindert. Die Verwendung von Denhardt's Lösung wird für Northern-Hybridisierungen, Hybridisieren von RNA, 'Single copy Southern Hybridisierung' oder Hybridisierung mit DNA, die an Nylon-Membranen immobilisiert ist, empfohlen. Denhardt's Lösung wird üblicherweise als 50X Stammlösung (50X Reagenz: 5 g Ficoll® 400, 5 g Polyvinylpyrrolidon, 5 g BSA Fraktion V in Wasser ad 500 ml) hergestellt, filtriert und bei -20°C gelagert. Die Stammlösung wird in 10X Prehybridisierungspuffer (meistens 6X SSC oder 6X SSPE mit 0,5 % SDS und 100 ?g/ml denaturierte, fragmentierte 'salmon sperm DNA') verdünnt.

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