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Gruppe:Biochemikalien
Untergruppe:Mikrobiologische Nähmedien und Zusätze,Fertigmedien,Coliform-Agar chromogen
Artikel:Coliform-Agar, chromogen (Platte (? 55 mm)) für die Mikrobiologie, Menge: 30 Platten, Chromogenes Selektivmedium zum Nachweis von E. coli und der Gesamtheit coliformer Bakterien

CCA Coliforms, Chromogenic Agar (Prepared Plate (@ 55 mm)) for microbiology, packaging size: 30 plates, Chromogenic Selective medium for detection of the total coliforms and E.coli

Laborbedarf,Biochemikalien,Mikrobiologie,Coliform Agar
Bezeichnung:

Chromogenes Selektivmedium zum Nachweis von E. coli und der Gesamtheit coliformer Bakterien

Spezifikation (Zusammensetzung g/l):

  • Gallensalze Nr. 3: 3,0
  • Natriumchlorid: 5,0
  • mono-Natriumphosphat: 2,2
  • di-Natriumphosphat: 2,7
  • Natriumpyruvat: 1,0
  • L-Tryptophan: 1,0
  • Agar: 10,0
  • Sorbitol: 1,0
  • Tergitol-7: 0,15
  • Cefsulodin: 0,005
  • Vancomycin: 0,005
  • Chromogen Substrat b-GLU: 0,2
  • Chromogen Salmon GAL Substrat: 0,2
  • pH: 6,8 ± 0,2

Gefahrenhinweise:

  • WGK: 1
  • Lagerung: Lagerung +8 - +15°C
  • Mastername: Coliforms Chromogenic Agar
  • HS: 38210000
  • Festes, selektives und differenzielles Kulturmedium zum Nachweis und zur Zählung von Gesamtcoliformen und E. coli in Wasserproben durch die Membranfiltrationstechnik
  • 55mm Platten 9 ± 1 ml
  • 1 Box enthält 5 Palstikbeutel mit je 6 Platten
  • Haltbarkeit: 2 Monate
  • Die kombinierte Wirkung von Pepton, Pyruvat und Sorbitol ermöglicht ein schnelles Koloniewachstum in diesem Phosphatpuffer Medium, das auch eine einfache Gewinnung von subletal thermisch geschädigten Coliformen ermöglicht. Natriumchlorid bietet die richtige osmotische Umgebung, die für das Wachstum notwendig ist. Die Selektivität wird teilweise durch Tergitol® 7 erreicht, was das Wachstum von grampositiven Bakterien und einigen gramnegativen Bakterien hemmt, ohne die coliformen Bakterien zu beeinträchtigen.
Die Selektivität wird durch das Cefsulodin und Vancomycin verstärkt, das gegen Pseudomonas und Gram-negative Oxidase-positive Bakterien, Enterokokken und andere Gram-positive Bakterien wirkt
  • Die koloniale Differenzierung beruht auf der chromogenen Mischung, bestehend aus zwei Enzymsubstraten: 6-Chlor-3-Indoxyl-ß-D-galacto-pyranosid (Salmon®-GAL) und 5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-ß-D-glucuronide (X-Glucuronide).
  • Die erste wird durch das charakteristische Enzym von Coliformen, ß-D-Galactosidase, gespalten und verleiht den Kolonien von Coliformen eine lachsrote Farbe. Die zweite chromogene Substanz wird durch das für E. coli charakteristische Enzym ß-D-Glucuronidase und gespalten färbt die Kolonien dieser Bakterien blau.
  • E. coli hat die beiden Enzyme und spaltet beide chromogenen Substanzen, wodurch dunkelblaue bis violette Kolonien entstehen. Coliforme insgesamt sind die Summe der E. coli-Kolonien plus lachsrote Kolonien. Andere gramnegative Bakterien produzieren farblose Kolonien, außer einigen, die Glucuronidase-Aktivität (aber keine Galactosidase) besitzen, und sie produzieren hellblaue bis türkisfarbene Kolonien
  • Zur Bestätigung der E. coli-Kolonien in diesem Medium ist eine kleine Menge Tryptophan enthalten, um die Indolproduktion zu bestätigen: Beschichten Sie die blauvioletten Kolonien mit einem Tropfen Kovacs-Reagenz. Wenn das Reagenz eine kirschrote Farbe annimmt ein paar Sekunden bestätigt dies die Produktion von Indol und somit das Vorhandensein von E. coli.
  • Wenn der chromogene Agar für Coliforme mit der Membranfiltermethode verwendet wird, können die Farbe und das Wachstum der Kolonien durch die Eigenschaften des Membranfilters modifiziert werden. Es ist ratsam, eine Validierung des verwendeten Membranfiltertyps durchzuführen
  • Das spanische Gesundheitsministerium (Ministerio de Sanidad y Consumo) hat dieses Medium offiziell als alternative Methode für die mikrobiologische Analyse von Wasser für den menschlichen Gebrauch übernommen und eine neue Definition für Escherichia coli (Enterobacteriaceae, die die ß-D-Galactosidase exprimieren und die ßD-Glucuronidase-Enzyme gleichzeitig) und Colibakterien: Enterobacteriaceae, die das ß-D-Galactosidase-Enzym exprimieren.
  • Grenze des Verfahrens: Die Produktion von ?-Galactosidase, obwohl sie allen Coliformen gemeinsam ist, variiert von einem Stamm zum anderen und wird durch die Temperatur und Inkubationszeit beeinflusst. Bei Temperaturen über 37 °C nimmt seine Produktion ab, was zu einem Verlust der rötlichen Farbintensität führt, während die bläulichen Töne in den Stämmen von Escherichia coli verstärkt werden. Bei Anwendung der Membranfiltrationsmethode muss berücksichtigt werden, dass die Art und Beschaffenheit der verwendeten Filtermembran auch Einfluss auf die Größe und Farbe der auf diesem Nährmedium gewachsenen Kolonien hat.
  • Ende 2014 trat die überarbeitete ISO Norm 9308-1 in Kraft. Diese legt fest, dass TTC Agar (Chapman oder Tergitol-7 Agar) durch CCA Coliforme Chromogenic Agar als Kulturmedium zur Auszählung von Escherichia coli und coliformen Bakterien nach Membranfiltration ersetzt wird. CCA basiert auf enzymatischen Reaktionen, die die Kolonien von coliformen Bakterien und E. coli unterschiedlich färben. Dieses Medium eignet sich für Proben mit einer geringen mikrobiellen Belastung, wie Trinkwasser, Swimmingpools, desinfiziertes Wasser und Wasseraufbereitungsanlagen

    Vorteile:

    • Sehr gute Wiederfindung
    • Ideal zum Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien in Wasserproben mit geringer Kontamination
    • Guter Farbkontrast für eine leichtere Auswertung
    • Wird als Trockennährboden und als 55-mm-Platten angeboten

    Durchführung:

    • 1. Die Wasserprobe wird durch einen Membranfilter mit einer Porengröße von 0,45 ?m gefiltert und gemäß der ISO Norm 7704:1985 validiert (*).
    • (*) Wenn der Coliforme Chromogenic Agar für coliforme Bakterien mit der Membranfiltermethode verwendet wird, kann sich die Farbe und das Wachstum der Kolonien durch die Eigenschaften des Membranfilters verändern. Es ist ratsam, eine Validierung des verwendeten Membranfiltertyps durchzuführen.
    • 2. Der Filter wird auf die Oberfläche des CCA-Mediums platziert, wobei darauf zu achten ist, dass keine Luftbläschen zwischen dem Filter und dem Medium eingeschlossen werden.
    • 3. Das Medium mit dem aufgelegten Filter wird für 18-24 Stunden bei 36 ± 2 ºC inkubiert. Falls nach 18h ein Wachstum von roten oder farblosen Kolonien zu beobachten ist, wird die Inkubationszeit auf 24h ausgedehnt, um auch geringe Aktivitäten der ß-Galactosidase oder ß-Glucuronidase zu erfassen.

    Auswertung:

    • E. coli: blau bis violett gefärbte Kolonien (ß-Galactosidase-positive und ß-Glucuronidase-positive Kolonien)
    • Andere coliforme Bakterien: lachrosafarbene bis rot gefärbte Kolonien (ß-Galactosidase-positive und ß-Glucuronidase-negative Kolonien)
    • Die Gesamtkeimzahl der coliformen Bakterien wird durch Addition der lachsrosafarbenen bis roten Kolonien und der blauen bis violetten Kolonien berechnet
    • Die Gesamtkeimzahl der coliformen Bakterien wird auf 100 ml Probenvolumen berechnet und als Anzahl koloniebildende Einheiten pro 100 ml (KBE/100 ml) ausgewiesen

    Verifizierung:

    • Zur Bestätigung der E. coli Kolonien ist diesem Medium Tryptophan zugesetzt, um die Bildung von Indol nachzuweisen:
    • Die blauen Kolonien werden mit einem Tropfen Kovacs -Indolreagenz überschichtet. Eine kirschrote Verfärbung des Reagenz nach wenigen Sekunden zeigt Indolbildung und damit E. coli an.
    Coliform-Agar, chromogen  (Platte (? 55 mm)) für die Mikrobiologie, Menge: 30 Platten, Chromogenes Selektivmedium zum Nachweis von E. coli und der Gesamtheit coliformer Bakterien</p>CCA Coliforms, Chromogenic Agar (Prepared Plate (@ 55 mm)) for microbiology, packaging size: 30 plates, Chromogenic Selective medium for detection of the total coliforms and E.coli</p>Laborbedarf,Biochemikalien,Mikrobiologie,Coliform Agar